1. 造模化合物
1-甲基－4－苯基－1，2，3，6－四氫吡啶（MPTP）是一種神經毒素，常用 于制作帕金森病動物模型。
2. 實驗動物
野生型斑馬魚 AB 或 TU 品系。斑馬魚飼養和管理均按照常規方法。飼養空 間溫度 28-30°C。
3. 造模化合物處理
MPTP 為 Sigma (M0896) 產品，MPTP 母液用純水制備，濃度為100 µM， 儲存于－20 °C. MPTP工作液用飼養液稀釋至50、100、200、500 µM。將斑馬魚幼體暴露于MPTP 工作液24小時，收集幼體，進行下一步處理。
4. RT-PCR檢測PD相關基因轉錄水平
收集斑馬魚于 TRIzol reagent (Sigma).提取總 RNA，進行 RT-PCR 檢測 PD 相關的基因表達水平。PCR 引物見表 1。
表 1. Primer pairs and parameters of PCR in the study
5. 原位RNA雜交
收集斑馬魚于4% paraformaldehyde固定。Th基因探針片段為PCR產物（表1）， 并被克隆到載體pGEM-T質粒上。探針的合成按照試劑盒(DIG RNA labeling kit (Roche Applied Science, 1175041)）說明制備th基因RNA雜交探針。按照操作程序 將斑馬魚樣本與探針溫育、檢測、拍照。
6. 原位免疫熒光檢測
按照常規程序，將斑馬魚幼體與TH蛋白單克隆抗體(Minipore, MAB318)溫 育，然后用FITC-標記的二抗溫育、洗滌，顯微鏡下檢測、拍照。
7. Western blotting
用RIPA lysis kit (Applygen Technologies Inc., C1053)提取斑馬魚總蛋白，進 行SDS-PAGE、轉膜，用PD相應蛋白的抗體和二抗進行檢測。β-ACTIN抗體，mouse anti-human ACTB antibody (Zhongshan Goldbridge, TA09); 小鼠
anti-GAPDH mAb (Zhongshan Goldbridge, TA08); 兔anti-mouse TH monoclonal antibody (Minipore, MAB318); PINK1 (D8G3) 兔mAb antibody (CST, catalog no. 6946); Parkin mAb antibody (CST, catalog no. 4211); β-syn (Syn205) 小鼠mAb antibody (CST, catalog no. 2644)。
8. 斑馬魚行為學實驗
幼體行為記錄采用ZebraLab (法國Viewpoint, ZebraLab 3.3)儀器，幼體逐個放 入96-孔板，(1 fish/well). 記錄運動距離、游泳持續時間、速度和游泳軌跡。每5 分鐘記錄一次數據。
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