斑馬魚(Zebrafish, Danio rerio) AB。

1. HCV 亞子基因載體

HCV 亞子基因載體由兩部分組成：mini-HCV genome 和 HCV-RNA 多聚酶 (NS5B)表達載體。具體構建：克隆小鼠肝臟特異的肝核因子 4a(mHNF4a)序列，并將此序列替換我們前期的 HCV 構件的 CMV 啟動子，獲得含有 GFP 報告基因的肝臟特異的 mini-HCV genome。克隆斑馬魚的肝型脂肪酸結合蛋白基因的增強子(L-fabpe) 和人肝脂酶啟動子序列(hLP)，并與 NS5B 編碼序列和報告基因 RFP 序列重組到真核細胞表達載體上，獲得肝臟特異的 NS5B 表達載體。這兩個基因構件結構圖見圖 1A。

2. 實驗動物

野生型斑馬魚 AB 品系。

3. 造模

取野生型斑馬魚受精卵（1-4 cell 期），通過顯微注射將 HCV 亞子的兩個基因構件混合物(1–5 ng/ml)共注射到受精卵內。正常飼養。待胚胎發育至 4 dpf 幼體，進行后續檢測。

4. 模型分析指標

（1） 癥狀觀察

以 WT 斑馬魚為對照，觀察斑馬魚幼體表型和生長的變化。

（2） 病毒檢測

初篩：熒光顯微鏡下觀察、拍攝幼體內報告基因的表達分布：在肝臟有綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白共表達的幼體，即為 HCV 亞子模型個體。確證：采用斑馬魚整體原位雜交實驗、RT-PCR 和 Western blot 檢測 HCV 亞子的和 HCV 特異的酶 NS5B 的表達及其肝定位。

（3） 病理診斷

HCV 基因可導致宿主體內病理變化，首先反映在相關基因表達的變化。我們采用 RT-PCR 和 Western blot 方法檢測了 HCV 的效應基因如：Solute carrier family 2 (ScarF2)、Leucine-rich repeat-containing G protein coupled receptor 5 (Leugpcr)、Ras-related GTP binding D (Rasgbd)和 Argininosuccinate synthetase 1 (Argsyn)；內質網 應激和 UPR 相關基因如：chop、atf4、atf6 和 bip 基因。