斑馬魚(Zebrafish, Danio rerio) AB 或 TU 野生型品系均可。

1. 實驗動物

野生型斑馬魚 AB 或 TU 品系 5 dpf 幼體。斑馬魚的位聽覺器官由相當于哺乳動物內耳的耳囊及其附屬結構構成，包括神經丘(有數個位于中心的毛細胞和圍繞在周圍的支持細胞構成)、半規管和兩個耳囊（橢圓囊和圓囊，相當于人的卵圓窗和圓窗），其功能與人類內耳相同。另外，在斑馬魚側線系統上的神經丘毛細胞也具有位覺功能。斑馬魚 5-dpf 幼體直到成年，其對聲音的刺激域和頻寬是不變的。因此，斑馬魚的位聽覺器官是研究位聽覺的理想模型。

2. 造模化合物及其對斑馬魚的處理

造模藥：氨基糖苷類藥物：慶大霉素(Gentamycin)、新霉素(Neomycin)和鏈霉素(Streptomycin)。三種造模藥通過預實驗確定給藥濃度梯度。均使用人工海水直接配置。將發育至 6 hpf 的斑馬魚胚胎暴露于上述三種氨基糖苷類藥液中，直至 72 hpf。撤去藥液，用正常飼養液清洗斑馬魚后，繼續發育至 5、6 dpf，進行后續處理。

3. 模型分析指標

（1） 癥狀觀察

斑馬魚身體平衡失調和體位異常與其位覺功能損傷相關。正常斑馬魚的 5 dpf幼體靜止時體位為俯位。斑馬魚幼體在靜止時呈斜側位，或游動姿態異常，均為體位失衡。

（2） 毛細胞損傷檢測

取野生型和造模藥處理的斑馬魚幼體（6 dpf），分別浸入活體熒光染料 1 μM Yo-Pro-1（Invitrogen）的人工海水中避光孵化 1 小時，將斑馬魚用人工海水洗三 次，再將胚胎置于麻醉劑 MS222 (3-aminobenzoic acid ethylester, methanesulfonate salt, Sigma) 0.1mg/ml 中，麻醉后在熒光顯微鏡下觀察毛細胞形態、數量和排列，并拍攝、計數。

（3） 病理診斷

顯微鏡下觀察活體幼體耳結構的變化，包括半規管和耳囊形態結構的變化。以同批野生型斑馬魚幼體為正常對照組，藥物處理組撤藥 2 天后，以耳石周圍的 MI1、MI2、O1、O2、IO4 五個部位的神經丘毛細胞作為主要觀察對象，結合側線神經丘和毛細胞的觀察、計數。以神經丘毛細胞數量減少和毛細胞結構異常為病理診斷指標。

（4）基因檢測

RT-PCR 方法檢測聽覺發育基因的轉錄水平：

收集野生型和藥物不同濃度處理胚胎各 40 枚, 用 Trizol 提取總 RNA; 以 AMV 反轉酶反轉錄試劑盒(Promega 3 Co.) 合成 cDNA1st 模板；進行常規 PCR。以 β-actin 基因作為內參基因。PCR 產物電泳, 凝膠成像分析儀拍照記錄。