LC-MS/MS蛋白鑒定
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發(fā)布時(shí)間:2025-07-25 08:49:03 更新時(shí)間:2025-08-28 10:27:05
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作者:中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心
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質(zhì)譜是將待測物質(zhì)變?yōu)闅鈶B(tài)離子并將離子按質(zhì)荷比(m/z)進(jìn)行分離和分析的一種方法。蛋白先經(jīng)胰蛋白酶消化成肽段,肽段在質(zhì)譜儀中離子化后,會(huì)帶上一定量的電荷,通過檢測器分析,可得到各肽段的質(zhì)荷比(m/z),即一級(jí)質(zhì)譜圖;為獲得肽段更詳細(xì)的序列信息,部分肽段再次被破碎和分析,產(chǎn)生二級(jí)質(zhì)譜圖。最后采用質(zhì)譜檢索軟件選擇相應(yīng)的蛋白數(shù)據(jù)庫,對(duì)獲得的全部質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,同時(shí)以打分的形式將鑒定到的蛋白依次排列,得到樣本中蛋白的定性結(jié)果。
LC-MS/MS蛋白質(zhì)鑒定是一種廣泛應(yīng)用于生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的技術(shù),用于識(shí)別和量化樣品中的蛋白質(zhì)。LC-MS/MS代表液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(Liquid Chromatography - Tandem Mass Spectrometry)。該技術(shù)結(jié)合了液相色譜(LC)的分離能力和質(zhì)譜(MS/MS)的高靈敏度檢測能力,使其能夠分析復(fù)雜樣品中的蛋白質(zhì)組成。
過程大致可以分為以下幾個(gè)步驟:
1. 樣品準(zhǔn)備:樣品首先經(jīng)過蛋白質(zhì)提取、純化,然后通常通過酶解(如用胰蛋白酶)將蛋白質(zhì)分解成較小的肽段。
2. 液相色譜分離:將處理過的樣品通過液相色譜儀進(jìn)行分離。色譜柱中的不同組分會(huì)根據(jù)其親水性或疏水性在不同時(shí)間被洗脫出來。
3. 質(zhì)譜檢測:隨后,這些分離的肽段被引入到質(zhì)譜儀中。在第一輪質(zhì)譜(MS)檢測中,測定肽段的質(zhì)荷比(m/z)。然后,選定的肽段在第二輪質(zhì)譜(MS/MS)中被進(jìn)一步碎裂,產(chǎn)生一系列特定的碎片離子,這有助于推斷其序列。
4. 數(shù)據(jù)分析:最后,利用專門的軟件對(duì)MS/MS數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,通過匹配數(shù)據(jù)庫中的已知蛋白質(zhì)或肽段序列,來識(shí)別樣品中的蛋白質(zhì)。
LC-MS/MS蛋白質(zhì)鑒定技術(shù)因其高靈敏度、高通量和高準(zhǔn)確性,在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中扮演著重要角色。它能夠揭示蛋白質(zhì)的表達(dá)水平、修飾狀態(tài)以及相互作用,對(duì)于理解生物過程、疾病機(jī)制以及開發(fā)新的治療策略具有重要意義。
證書編號(hào):241520345370
證書編號(hào):CNAS L22006
證書編號(hào):ISO9001-2024001
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