小鼠模型是登革病毒感染及登革熱發病機制研究的重要工具。科研人員最初使用登革病毒臨床分離株顱內感染正常小鼠，感染效果差，且出現麻痹等神經癥狀，不適合建立動物模型。之后，鑒于干擾素的抗登革病毒作用，研究者利用缺乏IFN-ɑ/β、IFN-γ受體的AG129小鼠構建登革病毒感染模型，但存在一定程度的免疫抑制，限制了該模型的應用。然后，為建立免疫完整性更高的小鼠模型，使用交替傳代病毒株感染I型干擾素受體敲除小鼠（Ifnar1^-/-）建立小鼠模型。這些模型都未能很好的展現血漿滲透、血小板降低、肝腎損害等重癥登革熱的典型表現。基于此，本研究擬通過小鼠體內傳代，獲得登革病毒小鼠適應株，感染Ifnar1^-/-小鼠建立重癥登革熱小鼠模型。

1. 小鼠感染：使用1ml胰島素注射器分別吸取100 μL病毒液（8×10⁶ Copies/μL），尾靜脈接種4-6周Ifnar1^-/-小鼠。每日進行稱重，觀察小鼠臨床表現。發病率評分基于Orozco等人描述的1至5的等級：1. 健康；2. 輕度嗜睡；3. 嗜睡、豎毛、弓背；4. 嗜睡、豎毛、弓背、虛弱；5. 垂死。感染后第2、4、6、8天動物眼眶采血，用于血常規檢查；分離并凍存血清，用于病毒載量測定；血漿用于細胞因子測定；分批安樂小鼠，采取腸、脾臟、腎臟、肝臟、腦等器官，用于病毒載量檢測及組織病理學觀察。

2. 病毒載量檢測：使用實時熒光定量PCR方法檢測小鼠血清和組織中的病毒核酸。簡單的，配置反應體系，上下游引物及探針序列分別為DENV-F: 5’-GAR AGA CCA GAG ATC CTG CTG TCT-3’，DENV-R: 5’-ACC ATT CCA TTT TCT GGC GTT-3’, Probe: (FAM)AGC ATC ATT CCA GGC AC (MGB)。Real-time PCR反應條件為：50℃ 30min；95℃ 15min；94℃ 15s；60℃ 60s，40個循環。

3. 全血細胞計數：收集300μL小鼠血液至EDTA抗凝管中，使用愛德士ProCyte Dx* 全自動血細胞分析儀對樣本進行血細胞分析。方法如下：首先輸入樣本編號，選擇小鼠物種、類別和模式；其次準備樣本：輕輕倒轉樣本10次，確保其混合均勻；最后將裝有樣本的采血管放入適配器；然后開始分析。主要分析：紅細胞計數（RBC）、紅細胞比容（HCT）、血小板計數（PLT）、中性粒細胞計數（NEUT）、淋巴細胞計數（LYMPH）。

4. 組織病理學觀察：安樂小鼠，解剖采集腸、脾臟、肝臟、腎臟、腦組織，進行蘇木精-伊紅（HE染色）。方法簡述：組織塊經10%的多聚甲醛固定、脫水透明后，置于熔化的石蠟中進行包埋，進而制作石蠟切片；切片脫蠟后進行HE染色；進一步的脫水透明，封片，顯微鏡下觀察。

5. 細胞因子分析：收集300μL小鼠血液至EDTA抗凝管中，分離血漿，進行細胞因子檢測。方法簡述：1）稀釋試劑 ；2）溶解標準品并對倍稀釋；3）準備微球，與樣本共同孵育；4）洗板；5）加入檢測抗體；6）再次洗板；7）加入SA-PE ；8）洗板； 9）上機檢測 ；10）結果分析。