細胞因子激活酪氨酸蛋白激酶（JAK） /信號轉導和轉錄活化因子（STAT） 5 是幾乎所有腸道細胞因子，生長因子和生長激素下游轉錄活化因子 。去除或減少 STAT5 能夠導致胚胎干細胞，造血干細胞，肝干細胞，髓樣干細胞，以及乳腺干細胞分化異常和組織功能障礙 。

我們實驗室報道了敲除腸上皮 STAT5 導致 Lgr5+ IESC 再生障礙，上皮屏障缺失，增加腸炎易感性 。相反， 短暫的 STAT5 酪氨酸磷酸化（pYSTAT5） 能夠增加Lgr5+腸干細胞再生，保護腸道，減輕實驗性腸炎。 但是， STAT5 是否能夠調節 IESC 內源性的轉錄、激活因子，調節何種上游細胞因子以及誘導何種腸上皮分化，還未見報道。因此我們使用特定的 Stat5 復合基因工程小鼠與Lgr5CreER-GFP-RstdToamtoCreER 小鼠，進行腸上皮細胞分化的譜系追蹤來確定持續性的 pYSTAT5 激活能夠誘導腸道干細胞分化為何種細胞類型。

實驗動物：Lgr5-EGFP-CreERT2小鼠，ROSA26-tdTomato小鼠，Stat5 或 icS5 floxed小鼠

試劑：tamoxifen(100mg/kg)，4%PFA

儀器：冰凍切片機，leica DMI8活細胞工作站

實驗操作規程：將Lgr5-CreGFP;RstdToamto-CreER 小鼠系與Stat5 或 icS5 floxed小鼠雜交，分別為對照組（Lgr5-CreGFP;RstdToamto-CreER）；實驗1組（Lgr5-CreGFP；RstdToamto-CreER;Stat5）；實驗2組（Lgr5-CreGFP；RstdToamto-CreER;icS5）。在小鼠4周齡時，提取雜交小鼠鼠尾DNA，通過凝膠電泳檢測小鼠基因型。Lgr5基因PCR引物序列如下(擴增目的片段長174bp)。Common 8060：5'-CTGCTCTCTGCTCCCA GTCT-3'；Wild Type 8061：5'-ATACCCCATCCCTT TTGAGC-3'；Mutant 9402：5'-GAACTTCAGGGTC AGCTTGC-3'。PCR條件：預變性94℃3min；94℃變性30s，66℃復性1min，72℃延伸30s，35個循環；72℃延伸5min。選取雙陽性小鼠，6~8周齡，體重20~22g。實驗組小鼠按100mg/kg體重腹腔注射他莫昔芬，對照組小鼠注射等量的玉米油。通過 Tam 誘導， 然后分別在 12 小時和 1, 3, 5, 7, 30， 122和280天麻醉處死各組小鼠。分別取結腸、空腸、回腸組織，用冷PBS沖洗腸道組織，縱向剖開，放入多聚甲醛中固定過夜，制作冰凍切片在子代腸上皮細胞中追蹤檢測是否去除 Stat5 或活化 STAT5 能夠改變腸上皮中的tdToamto 信號強度和位置.

1、 基因鑒定信息

圖1  Lgr5, Rosa26tdTomato基因凝膠電泳鑒定結果